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分析性離心機技術(shù)應(yīng)用于大分子純度估價及構(gòu)象檢測

分析性超速離心機設(shè)備的技術(shù)原理已廣泛地用于研究DNA制劑、病毒和蛋白質(zhì)的純度。如果需要準(zhǔn)確地估價分子的分子量的話,樣品的純度當(dāng)然是極其重要的。用沉降速度的技術(shù)來分析沉降界面是測定一個制劑均質(zhì)性的**廣泛使用的方法之一。出現(xiàn)單個清晰的沉降界面一般認(rèn)為是均質(zhì)的。制劑中的雜質(zhì)以另外一些峰小現(xiàn)在主峰的二側(cè)或主峰的一側(cè)。
  
分析性超速離心機已成功地用于檢測大分子構(gòu)象的變化。例如DNA可能以單股或雙股出現(xiàn),其中每一股在本質(zhì)上可能是線性的,也可能是環(huán)狀的。如果遇到某種因素(例如有機溶劑或高溫)DNA分子可能發(fā)生一些構(gòu)象的變化,這些變化也許是可逆的,也許是不可逆的。構(gòu)象上的變化可以通過檢查樣品在沉降速度中的若異來證實。分子越是緊密,那么它在溶劑中的摩擦阻力越小。分子越是不規(guī)則,摩擦阻力就越大,沉降就越慢。因此,通過樣品在處理前后沉降速度的差異可以檢測它在構(gòu)象上的變化。
  
對于變構(gòu)蛋白(如天冬氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶),構(gòu)象的改變可能伴隨著蛋白質(zhì)與底物或小的配位體(激活劑或抑制劑)的結(jié)合。此外,蛋白質(zhì)用脲素相對氯(高)汞苯甲酸那樣的試劑處理可以導(dǎo)致蛋白質(zhì)解離成它的原體(Protomer)。所有這些變化都可以很容易地用分析性超速離心來進行研究。
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